میکروسکوپ نوری
بیشتر میکروسکوپهای دانشجویی در گروه میکروسکوپهای نوری طبقهبندی میشوند. در میکروسکوپ نوری، نور مرئی از داخل نمونه (نمونه بیولوژیکی) عبور میکند و از طریق سیستم لنز شکسته میشود و به کاربر امکان میدهد تا تصویر را با بزرگنمایی مشاهده کند.
میکروسکوپهای نوری ساده با یک لنز میتوانند نمونه را تا 300 برابر بزرگنمایی کنند و به همین دلیل با این میکروسکوپها قادر به دیدن برخی از باکتریها هستیم، در حالی که میکروسکوپهای نوری مرکب میتوانند نمونه را تا 2000 برابر بزرگنمایی کنند. میکروسکوپ نوری ساده میتواند زیر 1 میکرومتر (یک میکرومتر برابر با یک میلیونم متر است) قدرت تفکیک داشته باشد، در حالی که قدرت تفکیک و وضوح میکروسکوپ مرکب ممکن است تا حدود 0٫2 میکرومتر باشد.
اجزای اصلی میکروسکوپ نوری
پایه
یک قطعه شامل یک بخش پایین به صورتهای مختلف و گاهی بصورت نعل اسبی است. که بر روی میز محل مطالعه قرار میگیرد. پایه دارای ستون است که اجزا مختلف به آن متصل میشود. وزن پایه نسبتا زیاد است. و اجزائی که بر روی پایه سوارند عبارتند از: چشمه نور و حرکت دهنده لوله میکروسکوپ.
لوله
این لوله بخشی است که عدسیها یا لنزهای چشمی و شیئی در آن جای دارند و هر کدام دارای بزرگنماییهای مختلفی هستند.
عدسیهای شیئی
عدسیهای چشمی
وظایف چشمی عبارتند از: بزرگ سازی تصویر معکوس حاصله از عدسی شیئی. تشکیل تصویر مجازی از تصویر حاصله بوسیله عدسی شیئی. اندازه گیری و سنجش اجزا واقع در تصویر. چشمیها دارای انواع مختلفی میباشند. دو نوع معروف و معمول آنها عبارتند از چشمی هویگنس (Huygenian) و چشمی رامزدن (Ramsden). چشمی هویگنس متشکل از دو عدسی سطح محدب میباشد. یک طرف هر کدام مسطح و یکطرف محدب میباشد.
در نوع هویگنس سطح محدب هر دو عدسی بطرف پایین است. بین این دو عدسی دیافراگم قرار گرفته، دیافراگم در محل کانون عدسی بالای عدسی چشمی واقع است. عدسی پایین پرتوهای رسیده از عدسی شی را جمع آوری نموده و در محل دیافراگم یا در نزدیکی آن متمرکز مینماید. عدسی چشمی این تصویر را بزرگ نموده و البته بصورت یک تصویر مجازی بزرگ شده به چشم فرد مشاهدهگر منتقل میکند.
کار دیافراگم کاهش خیره کنندهگی نور رسیده به چشم بیننده است. چشمیهای هویگنس به چشمیهای منفی معروفند و دارای بزرگنمایی ۱۰ و ۵ میباشند. چشمی هویگنس دارای قیمت نسبتا ارزان و کارایی مناسب میباشد، اشکال عمده آن محدود بودن میدان دید و عدم تامین راحتی کافی برای چشم است. چشمیهای رامزدن به چشمیهای مثبت معروفند. این چشمیها با دقت خوبی انحرافات عدسیهای آپکروماتیک را تصحیح مینمایند.
سیستم روشنایی
میکروسکوپها دارای محدودیتهای متعددی هستند. و لیکن در عمل اغلب روشنایی میکروسکوپ موجب محدودیت اصلی میشود. بنابراین تلاشهای زیادی در تهیه روشنایی و روش تهیه روشنایی مناسب برای میکروسکوپها گردیده است. پس تهیه نور مناسب میتواند نقش اساسی در وضوح تصویر داشته باشد. روشنی محیط نمیتواند برای تهیه تصویر مناسب و کافی باشد، لذا در تهیه روشنایی حتما باید از لامپها و چشمههای مصنوعی نوری استفاده میشود. لامپهای مورد استفاده در میکروسکوپها عبارتند از:
- لامپ هالوژن: این لامپ نور سفید ایجاد میکند. متشکل از یک رشته تنگستن در گاز هالوژن میباشد. حاصلضرب شدت نور حاصله در طول عمر این لامپ تقریبا ثابت است. از لحاظ قیمت در مقایسه با لامپ جیوه و گزنون ارزانترو برای کا است. وبرای فتومیکروگرافی مفید است.
- لامپ تنگستن: این لامپها در میکروسکوپهای ارزان قیمت و آموزشی بکار میروند.
- لامپ گزنون: این نوع لامپ یک لامپ تخلیه الکتریکی است. این لامپها دارای پایداری بیشتری نسبت به لامپهای جیوهای میباشند.
- لامپ جیوهای: این لامپ همانند لامپ گزنون از طریق تخلیه الکتریکی ایجاد نور مینماید. لامپ جیوهای حاوی مقدار کمی جیوه است. که در اثر یونیزه شدن هوای داخل لامپ ، یونهای تولید شده موجب تبخیر و یونیزه شدن جیوهها میشوند.
کندانسور
وظیفه کندانسور متمرکز سازی نور بر روی نمونه میباشد. کندانسور در زیر Stage که محل قرارگیری نمونه است واقع میشود.
- کندانسور آبه: این نوع کندانسور عموما در میکروسکوپهای معمولی بکار میروند. در این نوع کندانسورها دو عدسی بکار رفته است و دارای قیمت ارزان میباشند. این کندانسورها با عدسیهای شیئی و آکرومات CF با بزرگنمایی ۴x تا ۱۰۰x برای مشاهدات عمومی و کاربردهای تشخص مفید میباشند.
- کندانسور با عدسی متحرک: این کندانسور برای فتومیکروگرافی همراه با عدسیهای شیئی و پلن آکرومات از نوع CF مفید میباشند.
- کندانسور آکرومات: این گروه کندانسور در مشاهدات و فتومیکروگرافی مورد استفاده قرار میگیرد این نوع کندانسور با عدسیهای شیئی ۴x تا ۱۰۰x میتواند بکار رود.
- کندانسور آکرومات – آپلانت: این نوع کندانسور را پایه همراه با عدسی های شیئی آپوکرومات بکار برد این کندانسور ها برای فتومیکروگرافی جهت تصویرگیری از اجزا بسیار ریز بسیار مفید می باشد.
- کندانسور جهت عدسیهای شیئی با توان کم ، که این نوع کندانسور معمولا در بزرگنماییهای بسیار پایین مثل عدسی شیئی با بزرگنمایی ۴x تا ۴۶۰x مفید هستند.
چگونگی تشکیل و مشاهده تصویر
نور به صورت موج سینوسی پیوسته انتشار نمییابد و لیکن میتوان تصور کرد که یک فوتون همچون یک بار ولی با سرعت ۳۰۰۰۰۰ کیلومتر در ثانیه حرکت میکند. و چون این ذرات بطور پیدرپی در حال تعقیب یکدیگرند، لذا در عمل راهی جز نمایش آنها به صورت یک موج پیوسته نیست. فوتونهای نوری میتوانند دارای طول موجهای متفاوتی باشند، رنگ نور بوسیله طول موج آن تعیین میشود. مخلوط نورهای مختلف موجب تحریک شبکیه چشم میشود که انسان احساس رنگ سفید مینماید.
اکثرا اشیایی که توسط میکروسکوپ مشاهده میشوند نسبت به نور شفاف میباشند و اجزای آنها تنها وقتی قابل مشاهده میباشند که این اجزا نسبت به زمینه دارای کنتراست (کنتراست در شدت و یا رنگ) باشند. وقتی که نور سفید به یک جسم قرمز بتابد، تمامی طول موجهای موجود در نور سفید بجز نور قرمز در آن جذب میشود. بنابراین یک جسم با ناحیه قرمز را در یک زمینه سفید بخاطر آنکه دارای کنتراست رنگی میباشد میتوان دید.
عدسی شیئی در میکروسکوپ که یک عدسی همگرا با فاصله کانونی کوچک است، تصویر حقیقی و وارونه و بزرگتر از شیئ را تشکیل میدهد. برای این منظور شیئ باید بینکانون عدسی شیئی وقرار گیرد، توان عدسی شیئی بزرگتر از توان عدسی چشمی است و تصویر اول را بزرگتر میکند (عدسی چشمی مثل ذره بین عمل میکند) و تصویر حاصل از عدسی شیئی باید در فاصله کانونی عدسی چشمی باشد. از این شیئ ، تصویر مجازی نهایی تشکیل میشود که بزرگتر است.