اصول اساسی ریل تایم PCR
واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (Real-Time PCR) در یک سیکلر حرارتی با ظرفیت نورپردازی هر نمونه با یک پرتو نور حداقل یک طول موج مشخص و تشخیص فلورسانس ساطع شده توسط فلوروفور بر انگیخته انجام می شود.
سیکلر حرارتی همچنین قادر است نمونه ها را به سرعت گرم و سرد کند ، در نتیجه از ویژگی های فیزیکی و شیمیایی اسیدهای نوکلئیک و DNA پلیمراز بهره می برد.
روند PCR به طور کلی شامل یک سری تغییرات دما است که ۲۵-۵۰ بار تکرار می شود. این چرخه ها به طور معمول از سه مرحله تشکیل شده اند:
مرحله اول، در حدود ۹۵ درجه سانتیگراد ، اجازه می دهد تا زنجیره دوتایی اسید نوکلئیک جدا شود.
مرحله دوم: در دمای حدود ۵۰-۶۰ درجه سانتیگراد ، اتصال آغازگرها با الگوی DNA را امکان پذیر می کند ؛
مرحله سوم: در دمای ۶۸-۷۲ درجه سانتیگراد، پلیمریزاسیون انجام شده توسط DNA پلیمراز را تسهیل می کند.
به دلیل کوچک بودن قطعات، مرحله آخر معمولاً در این نوع PCR حذف می شود. زیرا آنزیم قادر است تعداد آنها را در طول تغییر بین مرحله تراز و مرحله دناتوراسیون افزایش دهد.
بعلاوه، در PCR چهار مرحله ای، فلورسانس در طی مراحل کوتاه دمایی که فقط چند ثانیه در هر چرخه طول می کشد، با دمای مثلا ۸۰ درجه سانتیگراد، اندازه گیری می شود تا سیگنال ناشی از وجود دایمرهای آغازگر (Primer Dimer) کاهش یابد. هنگامی که از یک رنگ غیر خاص استفاده می شود.
دما و زمان استفاده شده برای هر چرخه به طیف گسترده ای از پارامترها بستگی دارد، مانند: آنزیم مورد استفاده برای سنتز DNA، غلظت یونهای دو ظرفیتی و دی اکسی ریبونوکلئوتیدها (dNTP) در واکنش و دمای پیوند آغازگرها.
ریل تایم PCR مدل LongGene +Q1000
ریل تایم PCR (ریل تایم پی سی آر) به جهت بررسی میزان بیان ژن های موجودات زنده طراحی و ساخته شده است.
محدودیت PCR ساده در عدم توانایی بررسی کمی میزان بیان یک ژن باعث شد که دانشمندان دست به اختراع روشی جدید زدند.
این روش جدید موسوم به واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (Real-Time PCR) منجر به ساخت دستگاه ریل تایم پی سی آر شد.
با توجه به مقایسات کمی گزارش شده که نسبت به گزارشات کیفی از ارزش بالاتری برخوردار هستند، تکنیک real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) نیز نسبت به تکنیک هایی چون RT-PCR که میزان RNA تولید شده در سلول را به شکل کیفی گزارش می کند، از ارزش بالاتری برخوردار می باشد.
ریل تایم PCR مدل +Q1000 برند Long Gene یکی از بهترین و به روز ترین کمپانی های چین میباشد. تمامی دستگاه های این کمپانی دارای گواهی ISO و CE میباشند.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.